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需要但未提供的試劑和器皿如下：

(1)?二氯甲烷，分析純

(2)?正己烷，分析純

(3)?甲醇，分析純

(4)?去離子水 ?????????

(5)?5mL圓底或錐底玻璃離心管

(6)?2ml玻璃進樣瓶或者5ml圓底玻璃試管（一次性）

(7)?5mL有機玻璃離心管架（24孔），1個

(8)?17*17*10cm瓷盤，1個

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試劑配制

預處理試劑：取1管試劑A，加入到1瓶試劑B中，劇烈震蕩使其完全溶解，備用【配制好的預處理試劑呈白色半透明狀，于2-8℃保存有效期10天】

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1.1預處理

1）稱取0.4±0.005g油樣于5mL玻璃離心管中，加入0.4mL?預處理試劑混勻；

2）室溫靜置5min（離心管斜躺在桌面上）

3）加入0.4mL去離子水、1mL正己烷劇烈振蕩2min；靜置分層約1min（此時可以先活化柱子）

1.2過SPE柱

1）活化：依次采用1mL二氯甲烷、1mL正己烷過柱

2）上樣：取1mL上層待凈化液加入柱中（見1.1預處理-3））；

3）淋洗：依次用1mL正己烷、1mL試劑C淋洗，最后吹空氣3s；

4）解吸：加入1mL二氯甲烷解吸（流速1mL/min），收集全部解吸液于2mL玻璃進樣瓶中

5）濃縮及復溶：40℃水浴氮吹干；加入1mL甲醇渦旋15s；取0.1mL甲醇復溶液，再加入

0.1mL樣本稀釋液渦旋15s

實驗前，請將檢測試劑盒從2-8℃冰箱中取出，于室內溫度20-28℃下平衡1小時！

1）取出平衡后的適量板條，其余放回鋁膜袋中；

2）依次：加50μL標準品/樣本于相應微孔中；加50μL酶結合物和50μL抗體至所有微孔；

3）蓋上板貼，于20-28℃下，孵育20分鐘；倒出微孔中液體；

4）將洗滌液注滿微孔浸泡15s倒出，重復2次；

5）加100μL底物至微孔中，于20-28℃下，孵育10分鐘；

6）加100μL終止液至微孔中，于450/630nm波長下，讀數

1）結合率計算公式

其中，

?????????????????????????????B：為i樣本或濃度點的結合率；

?????????????????????????????A_i：為i樣本或濃度點的吸光度；

?????????????????????????????A₀：為零標準孔的吸光度；

2）建立標準曲線：以標準品濃度的對數為x軸，以其對應的結合率B的logit值為y軸，進行線性擬合

建立標準曲線。將樣本結合率（計算見1）中公式）代入曲線方程，即可求出樣本中苯并（α）芘的含量。

3）超出檢測上限的樣本稀釋方法

①?將樣本前處理步驟“1.2過SPE柱-5）”中0.1mL甲醇復溶液用無水甲醇稀釋5倍；

②?將①的溶液，參照說明書采用樣稀稀釋后點樣；

③?將得出的含量再乘以5，即為最終樣本中苯并（α）芘的含量；

1）注意事項

n?不同產品、不同批次之間試劑不得混用；

n?吸取不同試劑，要更換吸頭，以免造成試劑污染；

n?底物變為藍色，表示已污染變質或過期，不得使用；

n?終止液中含鹽酸，使用時防止接觸皮膚，如不小心濺到，及時用大量流水沖洗，嚴

重時請及時就醫；

n?苯并（α）芘為致癌物，使用標準品、陽性樣本，須在通風櫥內進行操作，并

穿長袖實驗服，戴手套和口罩；