產品簡介

詳細介紹

產品描述
　　NP40裂解液（帶抑制劑）是一種比較溫和的細胞組織裂解液，主要成分為50 mM Tris(pH7.4)，150 mM NaCl，1% NP-40以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制。對胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用，有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。適用于常規的Western、IP和co-IP等實驗蛋白樣品的制備。
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產品組分

保存方法
　　裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保質期一年。
使用方法

對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1~2秒后，細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞：離心收集細胞，按照6孔板每孔細胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混勻，充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50~100萬細胞/管，然后再裂解。具體NP-40裂解液的使用量參照表1。

2. 對于組織樣品
(1) 把組織剪切成細小的碎片；
(2) 融解NP-40裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。
(3) 按照每20 mg組織加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事項

然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

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