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RIPA（強）細胞裂解液（帶抑制劑）

	價格：元(人民幣)	產地：本地
	最少起訂量：1	發貨地：本地至全國
	上架時間：2022-07-31 06:36:30	瀏覽量：16
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產品簡介

品牌 CAS 分子式純度分子量貨號規格供貨周期主要用途應用領域

自營品牌	/
/	/
/	AP01L013/AP01L014
50ml	現貨
對細胞膜、胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用,適用于PAGE、Western	生物產業

RIPA（強）細胞裂解液（帶抑制劑），通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對組織細胞的消化作用使組織細胞崩解釋放出蛋白質，是一種經典的動物組織/細胞快速裂解液。

詳細介紹

RIPA（強）細胞裂解液（帶抑制劑）

產品描述
　　RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液，通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對組織細胞的消化作用使組織細胞崩解釋放出蛋白質，是一種經典的動物組織/細胞快速裂解液。對細胞膜、胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用，適用于PAGE、Western Blotting和免疫沉淀(IP)的研究。RIPA裂解液的配方有很多種，根據其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。可以根據后續實驗的需要選擇，具體選擇標準見下表1。
訂購信息

產品名稱	貨號	規格	價格
RIPA（強）細胞裂解液（帶抑制劑）	AP01L013	50 mL	148
RIPA（強）細胞裂解液（帶抑制劑）	AP01L014	100 mL	218

產品組分

產品編號	產品組成	包裝規格
AP01L013	RIPA（強）細胞裂解液	50 mL
	PMSF 溶液（100 mM）	1 mL
	磷酸酶抑制劑II cocktail（50×）	1 mL
	產品說明書	一份
AP01L014	RIPA（強）細胞裂解液	100 mL
	PMSF 溶液（100 mM）	1 mL
	磷酸酶抑制劑II cocktail（50×）	2*1 mL
	產品說明書	一份

保存方法
　　裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保質期一年。
使用方法
1. 對于培養細胞樣品

(1) 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF (CAT:AP02L014)，使PMSF的終濃度為1 mM。(2) 細胞裂解

對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1~2 s后，細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞：離心收集細胞，按照6孔板每孔細胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混勻，充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，需分裝成50~100萬細胞/管，然后再裂解。具體RIPA裂解液的使用量參照表2。

(3) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

2. 對于組織樣品

(1) 把組織剪切成細小的碎片；(2) 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1 mM；(3) 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量，具體RIPA裂解液的使用量參照表2。(4) 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。(5) 充分裂解后，10000~14000rpm離心3~5 min，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注意事項

(1) RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。(2) RIPA（強）裂解液含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定蛋白。(3) 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。(4) 通常6孔板每孔細胞加入150 μL裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。表1：不同RIPA裂解液的選擇標準

產品應用	RIPA裂解液(強)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)
裂解強度	強	中	溫和
膜蛋白的提取	很好	較好	一般
胞漿蛋白的提取	很好	很好	很好
核蛋白的提取	很好	較好	較好
胞漿磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好
細胞核轉錄因子提取	很好	很好	很好
主要用途	WB, IP	WB, IP	WB, IP, co-IP

表2: RIPA裂解液的使用量

樣品來源	培養容器	收獲細胞數	RIPA用量	可制備樣品數
細胞	6孔板	2.5 x 10⁶	150-250 μL	400~600
	60 mm培養板	5.2 x 10⁶	300-500 μL	200~300
	90 mm培養板	12.2 x 10⁶	500-1000 μL	100~200
	25 cm²培養瓶	5 x 10⁶	300-500 μL	200~300
	75 cm²培養瓶	2 x 10⁷	1000-2000 μL	50~100
組織	20 mg組織塊	2.5 x 10⁶	150-250 μL	400~600

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