根據2002年版《消毒技術規范》的要求，現將我院消毒滅菌效果監測、環境微生學監測的采樣方法、結果判定、質控標準等規范如下：

 環境衛生學監測：包括空氣、物體表面、醫務人員手的監測
    采樣及檢查原則：采樣應具有一定數量和代表性，采樣后必須盡快對樣品按要求指標進行檢測，送檢時間不得﹥6小時，若樣品保存在冰箱內送檢時間不得﹥24小時。

醫院室內空氣的消毒

I 類環境：包括層流潔凈手術室和層流潔凈病房，要求空氣中的細菌總數≤10 cfu/m³。

II 類環境：包括普通手術室、產房、嬰兒室、早產兒室、普通保護性、供應室潔凈區、燒傷病房、重癥監護病房。要求空氣中的細菌總數≤200 cfu/m³。

     III類環境：包括兒科病房、婦產科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應室清潔區、急診室、化驗室、各類普通病室和房間，要求空氣中的細菌總數≤500 cfu/m³。

    1、  采樣時間：消毒處理后，操作前進行采樣。
     2、采樣方法：平板暴露法
   （1）布點方法：室內面積≤30 m²;，設內、中、外對角線3點，內外兩點距墻1米；室內面積＞30 m²，設東、西、南、北4角及中央5點，其中東、西、南、北均距墻1米。
   （2）采樣方法：將直徑為9cm普通營養瓊脂平板放在室內各采樣點處，采樣高度為距地面1.5米，采樣時將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露5分鐘，蓋好立即送檢。
    3、計算公式：
    空氣細菌菌落總數（cfu/ m³）=50000N∕（A × T）
    式中A為平板面積（cm²）；T為平板暴露時間（min）；N為平均菌落數（cfu）。平板面積：半徑²× π （π即3.14） 那么此公式可以簡化為N×157。
    4、注意事項：采樣前，關好門、窗，在無人走動的情況下，靜止10min 進行采樣。
    5、質控標準（結果判定）：
    Ⅰ類區域：細菌總數≤10cfu∕m³ (或0.2cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；
    Ⅱ類區域：細菌總數≤200cfu∕m³ (或4cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；
    Ⅲ類區域：細菌總數≤500cfu∕m³ (或10cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。

物體和環境表面消毒

I 類環境：包括層流潔凈手術室和層流潔凈病房。

II 類環境：包括普通手術室、產房、嬰兒室、早產兒室、普通保護性、供應室潔凈區、燒傷病房、重癥監護病房。

I、II類環境要求物體表面的細菌總數≤5 cfu/cm²。

III類環境：包括兒科病房、婦產科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應室清潔區、急診室、化驗室、各類普通病室和房間，要求空氣中的細菌總數≤10 cfu/cm²。

IV類環境：包括傳染病科及病房。要求物體表面細菌總數≤15 cfu/cm²。

1、采樣時間:在消毒處理后進行采樣。（或是在滅菌處理后，存放有效期內采樣）                   
    2、采樣面積：被采表面＜100/ cm²，取全部表面；被采表面>100 cm²，取100 cm²。小型物體表面的結果計算，用cfu/件表示。
    3、采樣方法：

①   壓印采樣法：采用一直徑為5.6 cm（面積約為25 cm²）的消毒塑料專用平皿，傾注營養瓊脂培養基，并使培養基高出平皿邊緣1-2mm,凝固后置4℃冰箱保存待用。采樣時將平皿上的瓊脂表面直接壓貼在被檢物體表面10-20秒后送檢。
置37℃培養箱培養24-48小時，計算并鑒定細菌。

②用5cm×5cm的標準滅菌規格板，放在被檢物體表面，采樣面積>100 cm²，連續采樣4個，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規格板內橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉動棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子投入10 ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管內，立即送檢。門把手等不規則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。
    4、采樣結果計算方法：
 
   物體表面細菌       平皿上菌落平均數 ×采樣液稀釋倍數
   菌落總數(cfu/cm²)＝─────────────────
                                 采樣面積(cm²)

采樣液稀釋倍數為10：（棉拭子投入10 ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管內）
    5、質控標準：

Ⅰ、Ⅱ類區域：細菌總數≤5cfu∕cm²，并未檢出致病菌為消毒合格。
    Ⅲ類區域細菌：總數≤10cfu∕cm²，并未檢出致病菌為消毒合格。
    Ⅳ類區域細菌：總數≤15cfu∕cm²，并未檢出致病菌為消毒合格。
    母嬰同室、早產兒室、嬰兒室、 新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門氏菌。
   

手和皮膚黏膜消毒：

1、采樣時間：在接觸病人和從事醫療活動前進行采樣或消毒后立即采樣。
    2、采樣面積及方法：

（1）手的采樣:被檢人五指并攏，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦 2 次(一只手涂擦面積約 30 cm²)，并轉動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入 10ml 含相應中和劑的無菌洗脫液試管內，立即送檢。

（2）皮膚粘膜采樣：用5cm×5cm的標準滅菌規格板，放在被檢皮膚處，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規格板內橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉動棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入10 ml含相應中和劑的無菌洗脫液的試管內，立即送檢。不規則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。若表面不足5cm×5cm，可用相應面積的規格板采樣。
    3、檢測方法：將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，用無菌吸管吸取1ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，內加入已溶化的45℃～48℃的營養瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃±1℃溫箱培養48h，計數菌落數。
    4、采樣結果計算方法：
                                       平板上菌落的平均數 ×采樣液 稀釋倍數
      細菌總數(cfu/ cm²) ＝ ─────────────────────────
                                  采樣面積(cm²)

其中采樣面積即為30×2。
5、質控標準：

Ⅰ、Ⅱ類區域工作人員：細菌總數≤5cfu∕cm²，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌為消毒合格。
    Ⅲ類區域工作人員：細菌總數≤10cfu∕cm²，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。
    Ⅳ類區域工作人員：細菌總數≤15cfu∕cm²，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。
    母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門氏菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。

 皮膚粘膜：參照手的衛生學標準執行。

醫療用品衛生標準：

1、             進入人體無菌組織、器官或接觸破損皮膚、粘膜的醫療用品必須無菌。

2、             接觸粘膜的醫療用品，細菌菌落總數應≤20cfu∕g或100 cm²，致病性微生物不得檢出。

3、             接觸皮膚的醫療用品，細菌菌落總數應≤200cfu∕g或100 cm²，致病性微生物不得檢出。

使用中消毒劑與無菌器械保存液衛生標準：

1、          使用中消毒劑：細菌菌落總數應≤100cfu∕ml，致病性微生物不得檢出。

2、          無菌器械保存液：必須無菌。